Às dèidh 25 latha de ghoir statach aig 28°C, sheall laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC620 an gnìomhachd as àirde ann am meadhan cultar fungach. B’ e na luachan pH agus teòthachd as fheàrr airson an einnsein seo 3.0 agus 70°C, fa leth. Às dèidh 2 uair a thìde de ghoir aig 40°C agus 50°C, chùm gnìomhachd an einnsein 68.33% agus 59.61%, fa leth. Às dèidh 2 uair a thìde de ghoir ann am bufair citrate-phosphate (pH 7.0), dh’fhan gnìomhachd an einnsein aig 100%. Mheudaich cur-ris 10 mM MgSO₄ agus CuSO₄ gnìomhachd an einnsein mu 21% agus 35%, fa leth, agus chuir NaCl, MnCl₂, KCl, agus CaCl₂ bacadh air gnìomhachd an einnsein. A’ cleachdadh ABTS mar fho-strat, b’ e 1.99 mM agus 16,217 μmol min−1 L−1 na paramadairean cineatach (Km agus Vmax) de laccase *Pleurotus ostreatus* NRC 620, fa leth. Lùghdaich làimhseachadh einsímeach air sampallan sùgh ubhal gu mòr an dà chuid pH agus slaodachd, agus bha an lùghdachadh seo co-cheangailte ri àrdachadh ann an ùine stòraidh. Mar thoradh air làimhseachadh laccase, chaidh susbaint iomlan phenolic sùgh ubhal a lùghdachadh beagan, ach cha deach lùghdachadh sam bith ann an gnìomhachd antioxidant fhaicinn.
Anns na bliadhnachan mu dheireadh, tha luchd-rannsachaidh air fòcas a chuir air cleachdadh bith-theicneòlas uaine ann an gnìomhachas a’ bhidhe. Tha laccase mar aon de na h-einsìmean as fheumail ann an gnìomhachas a’ bhidhe, a’ lorg thagraidhean ann an raointean leithid giullachd sùgh, bèicearachd, seasmhachd fìona, agus a’ leasachadh feartan organoleptic thoraidhean bìdh.1Bidh mòran lusan is meanbh-fhàs-bheairtean nas àirde a’ leigeil a-mach laccase,2agus faodaidh fungasan leithid deuteromycetes, ascomycetes, agus basidiomycetes laccase a thoirt gu buil cuideachd.3'S e ocsaidàs gorm a th' ann an laccase (EC 1.10.3.2) a bhios a' lughdachadh ocsaidean moileciuil gu uisge le bhith a' cleachdadh siostam anns a bheil trì dadaman copair eadar-dhealaichte, agus mar sin a' ocsaidachadh diofar choimeasgaidhean feanólach agus aiminean cùbhraidh. Rè cinneasachadh sùgh mheasan is ghlasraich, tha donnachadh einnseamach agus neo-einseamach nan cùisean deatamach.4Leis gu bheil na stuthan sin a’ toirt droch bhuaidh air dath, blas agus fàileadh an sùgh, feumar an toirt air falbh.5
De na measan uile, is iad ùbhlan as motha a thèid ithe air feadh an t-saoghail agus san Aonadh Eòrpach. Ann an 2019, bha cinneasachadh ubhal san treas àite air feadh an t-saoghail, a’ dol thairis air 87 millean tunna.6Tha grunn choimeasgaidhean phenolic ann an ùbhlan, nam measg flavonoids agus searbhagan phenolic leithid searbhag caffeic agus searbhag clorogenic.7Leis gu bheil sùgh ubhal mar as trice air a chaitheamh anns an riochd shoilleir aige, bidh timcheall air 50% gu 90% de na co-phàirtean phenolic air chall rè a’ phròiseas sìolaidh.8An-diugh, bidh luchd-cleachdaidh buailteach a bhith a’ taghadh thoraidhean le glè bheag de phròiseasadh, leithid sùgh ubhal sgòthach le susbaint àrd polyphenol. Ach, air sgàth an t-susbaint àrd phenolic a th’ ann, tha an seòrsa sùgh ubhal seo gu sònraichte buailteach do dhath agus dorchachadh.9Bithear a’ cleachdadh diofar theicneòlasan, a’ gabhail a-steach dòighean làimhseachaidh teas leithid pasteurachadh aig 60–90°C, gus dorchachadh sùgh ubhal a lughdachadh no casg a chuir air.10Ach, a rèir rannsachadh le Sauceda-Gálvez11, faodaidh giollachd teirmeach ceimigean luaineach a sgrios agus buaidh a thoirt air feartan organoleptic sùgh ubhal. Am measg roghainnean eile an àite dhòighean giollachd teirmeach tha carbon dà-ogsaid os-chritigeach, rèididheachd ultraviolet, ultrafhuaim, cuideam àrd hydrostatach, no homogenachadh àrd-bhruthadh.12Tha èifeachdas nan teicneòlasan seo agus toradh sùgh mheasan freagarrach an urra ris na paramadairean a thathar a’ cleachdadh agus feartan an toraidh. Tha an cleachdadh farsaing air a chuingealachadh le cosgaisean àrda, droch bhuaidhean air càileachd cuid de thoraidhean bìdh, no dì-ghnìomhachadh einnsein neo-iomchaidh.13,14
Faodar laccase a chleachdadh gus sùgh mheasan a dhaingneachadh agus a shoilleireachadh.15Gökmen et al.16Tha mi a’ moladh cleachdadh laccase airson soilleireachadh sùgh mheasan oir bidh e a’ toirt air falbh todhar phenolic gu h-èifeachdach le bhith gan tionndadh gu poileimeirean no oligomers a tha furasta an toirt air falbh le membran ultra-shìolaidh sam bith, a’ leigeil le sùgh ubhal dath agus soilleireachd seasmhach a chumail suas airson suas ri sia seachdainean aig 50°C. Chaidh laccase *Trichoderma* glan a dhèanamh neo-ghluasadach air grìogagan alumina agus a chleachdadh gus todhar mì-bhlasmhor air adhbhrachadh le truailleadh meanbh-bhitheach sùgh ubhal a thoirt air falbh gu roghnach.17
Tha timcheall air 80-90% de na co-phàirtean luaineach ann an sùgh ubhal nan eistearan agus aldehydan, a bheir fàileadh sònraichte don sùgh.18Chaidh laccase bho *Trametes versicolor* a cheangal ri taic shaor air a dhèanamh à snàithleach nàdarra bho shligean cnò-choille òga airson soilleireachadh sùgh ubhal.19Tha sgrùdaidhean a rinneadh roimhe air sgrùdadh a dhèanamh air seasmhachd sùgh ubhal (dath agus ceòthachd) a’ cleachdadh dhòighean gun enzyme no dòighean neo-ghluasadach, no ann an co-bhonn ri ultra-shìoladh.5,19Ach, chan eil buaidh laccases fungach air feartan fiosaigeach-cheimigeach sùgh ubhal rè stòradh fhathast soilleir. Mar sin, b’ e amas an sgrùdaidh seo sgrùdadh deuchainneach a dhèanamh air na h-atharrachaidhean anns na feartan fiosaigeach-cheimigeach, susbaint todhar phenolic, agus gnìomhachd antioxidant sùgh ubhal às deidh làimhseachadh le laccases fungach agus stòradh fuarichte airson dà sheachdain. Tha comas aig laccases todhar phenolic a oxidachadh, a tha gan dèanamh gealltanach airson an cleachdadh ann an grunn phròiseasan gnìomhachais, a’ gabhail a-steach soilleireachadh sùgh. Rinn an sgrùdadh seo sgrùdadh air laccases bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ag amas air na suidheachaidhean air leth freagarrach airson an gnìomhachd agus an èifeachdas ann an soilleireachadh sùgh. Ged a tha rannsachadh air balgan-buachair oisirean (P. ostreatus NRC 620) fhathast cuingealaichte, tha sgrùdaidhean roimhe air sgrùdadh a dhèanamh air enzyman bho dhiofar thùsan fungach, leithid Trametes versicolor agus Ganoderma lucidum. B’ e amas an sgrùdaidh seo measadh a dhèanamh air comas an enzyme seo a chleachdadh ann an gnìomhachas a’ bhidhe agus na feartan sònraichte aige a shoilleireachadh, gu sònraichte an pH agus an teòthachd air leth freagarrach aige.
Chaidh 2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) a cheannach bho Sigma-Aldrich (Canada). Bha na h-ath-bheachdan eile uile de ìre anailis.
Fhuair Ionad Cruinneachaidh Cultar Mion-fhàs-bheairtean an Ionad Rannsachaidh Nàiseanta an seòrsa aithnichte de bhalgan-buachair oisirean NRC620. Às dèidh fo-chultar, chaidh an seòrsa seo a stòradh air slatan agar dextrose buntàta aig 4°C. B’ e seo an dòigh ullachaidh inoculum: chaidh mycelium 10 latha a dh'aois, làn-leasaichte, a chur air truinnsearan agar dextrose buntàta agus a ghoir aig 28°C. Às dèidh 10 latha, chaidh trì blocaichean mycelium 12-mm de thrast-thomhas a thoirt a-mach às a’ mheadhan agar a’ cleachdadh punch meatailt sterile agus an cur ann am flasgaichean Erlenmeyer 250-mL le plugaichean cotan anns an robh 50 mL de mheadhan cultar sterile (pH 5.0, mar a chaidh a mhìneachadh roimhe le Othman et al.20Chaidh na cultaran a ghoir aig 28°C airson 18 latha. An uair sin chaidh na cultaran a shìoladh tro phàipear-sìoltachain Whatman Àir. 1, agus bha an t-substaint a thig às a sin na thùs einnsein.
Chaidh gnìomhachd laccase a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh ABTS mar fho-strat. Bha 500 μL de 0.3 mM ABTS (air a sgaoileadh ann am bufair sodium citrate 0.1 M, pH 4.5) agus an ìre riatanach de shampall einnsein air a lagachadh le uisge grùide anns a’ mheasgachadh ath-bhualadh (2 mL).21,22A’ beachdachadh gun urrainn do laccase ABTS a ocsaidachadh aig teòthachd an t-seòmair (28 °C ± 2), chaidh ocsaidachadh ABTS a dhearbhadh le bhith a’ tomhas an àrdachadh ann an absorbance aig 420 nm (ε420= 36,000 cm-1 M -1) a’ cleachdadh speactrofotomeatair UV Agilent Carry-100. Bha feum air aon aonad de ghnìomhachd laccase gus 1 μmol ABTS a ocsaidachadh gach mionaid. Chaidh dùmhlachd pròtain a dhearbhadh leis an dòigh Bradford a’ cleachdadh albumin serum bovine mar smachd a-staigh.23,24
Às dèidh an enzyme fhaighinn bhon t-seòrsa balgan-buachair oisirean NRC 620, chaidh a ghnìomhachd a thomhas aig diofar amannan àiteachaidh airson 25 latha fo chumhachan statach aig 28 °C.
Gus buaidh teòthachd air gnìomhachd laccase a sgrùdadh, chaidh deuchainnean a dhèanamh anns an raon teòthachd bho 20 gu 90 °C. Mus deach an enzyme a chur ris agus an ath-bhualadh a thòiseachadh, chaidh am bufair (0.1 M sodium citrate, pH 4.5) agus an t-substrate (ABTS) a mheasgachadh agus a ghoir airson 5 mionaidean aig diofar theodhachdan. Chaidh seasmhachd teirmeach an enzyme a mheasadh le bhith ga ghoir ann am bufair sodium phosphate 0.05 M (pH 7.0) aig 40, 50, 60, agus 70 °C airson 2 uair a thìde, fa leth. Chaidh gnìomhachd fuigheall a mheasadh an uairsin a’ cleachdadh an t-substrate ABTS.
Chaidh buaidh pH air gnìomhachd laccase a mheasadh le bhith a’ cleachdadh ABTS mar fho-strat ann am bufairean citrate-phosphate 0.1 M le raon pH de 2.5 gu 7.0. Chaidh am fuasgladh einnsein a ghoir aig 40°C airson dà uair a thìde ann am bufairean citrate agus Tris 0.1 M (pH 3, 4, 6, agus 7) gus seasmhachd pH a mheasadh. Chaidh gnìomhachd fuigheallach le ABTS mar fho-strat obrachadh a-mach às dèidh goir.
Chaidh an laccase a ghoir airson 10 mionaidean ann am bufair fosfáit sodium (0.05 M, pH 7.0) anns an robh diofar ianan meatailt (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, agus Mn2+) aig dùmhlachdan de 2.5 mM agus 10 mM, fa leth. Chaidh an t-substrate (ABTS) a chur ris an uair sin gus an ath-bhualadh a thòiseachadh, agus chaidh an gnìomhachd coimeasach a mheasadh.
Chaidh ocsaidachadh ABTS le laccase aig diofar dùmhlachdan (0.025–3 mM) a thomhas aig pH 4.5 gus na paramadairean cineatach (Vmax agus Km) a dhearbhadh.cunbhalachdanChaidh co-aontar Michaelis-Menten obrachadh a-mach le bhith a’ cleachdadh plota Lineweaver-Burk, a bhios a’ plotadh co-phàirteach ìre an ath-bhualaidh mar ghnìomh de dùmhlachd an t-substrate. Chaidh na cunbhalachdan cineatach obrachadh a-mach bhon phlota Lineweaver-Burk le bhith a’ cleachdadh bathar-bog GraphPad Prism dreach 6.01.
Às dèidh na h-ubhlan a nighe gu mionaideach le uisge tap, chaidh an gearradh ann an leth agus an sùgh a dhòrtadh a-mach le bhith a’ cleachdadh inneal-sùgh ubhal Braun MP80 làn-fèin-ghluasadach (air a dhèanamh sa Ghearmailt). Chaidh an sùgh a shìoladh tro cheithir sreathan de chlò-chàise. Cha deach einsìmean sam bith a chur ris a’ bhuidheann smachd, agus chaidh 2.0% laccase (an dùmhlachd as èifeachdaiche a chaidh a dhearbhadh) a chur ri sùgh ubhal ùr-ullaichte, a chaidh an uairsin a stòradh aig 4°C airson dà sheachdain.
Chaidh searbhachd titrable (TA) agus pH a dhearbhadh a rèir modh Boulton et al.al.27Chaidh pH gach sampall a thomhas le bhith a’ cleachdadh meatair pH didseatach (meatair pH JENWAY 3510). Chaidh searbhachd titrable (TA) obrachadh a-mach stèidhichte air searbhag malic a’ cleachdadh na foirmle a leanas.
Far a bheil V agus C a’ riochdachadh meud (mL) agus dùmhlachd (0.1 mol/L) an fhuasglaidh sodium hydroxide a chaidh a chleachdadh anns an titration, fa leth. ’S e K an co-èifeachd tionndaidh searbhag malic, co-ionann ri 0.067, agus ’s e W mais (g) sùgh ubhal.
Na solidan so-sgaoilte iomlan (TDSChaidh susbaint ) nan sampallan sùgh uile a thomhas le bhith a’ cleachdadh refractometer pòcaid PAL-1 (ATAGO, Tokyo, Iapan). Às dèidh gach tomhais, chaidh an lionsa optigeach a shruthladh le uisge dì-ionichte, agus chaidh gach sampall sùgh ubhal a dhearbhadh trì tursan. Chaidh luach gach sampall obrachadh a-mach le bhith a’ dèanamh cuibheasachd de na trì tomhasan. Chaidh a’ chuibheasachd ± claonadh àbhaisteach airson gach sampall sùgh ubhal obrachadh a-mach cuideachd le bhith a’ dèanamh cuibheasachd de na toraidhean sin.
Chaidh slaodachd-leudachd nan sampallan sùgh ubhal a mheasadh le bhith a’ cleachdadh vioscometer rothlach (RV, Rheotest 2, a’ Ghearmailt). Chaidh an sampall a chur taobh a-staigh siolandair “S2″ a’ vioscometer. Chaidh slaodachd follaiseach a riochdachadh le leathad a’ chuarb cuideam rùsgaidh an aghaidh ìre rùsgaidh, a chaidh obrachadh a-mach bhon chuideam rùsgaidh agus na cuarban co-fhreagarrach aig diofar ìrean rùsgaidh (bho 1.00 gu 437.4 s⁻¹). Seo am foirmle airson slaodachd follaiseach obrachadh a-mach:
Far a bheil η na slaodachd follaiseach (cP), τ na cuideam rùsgaidh (dyn/cm²), γ na reat rùsgaidh (sec⁻¹), agus tha (τ) air a thomhas a’ cleachdadh luachan an torque (α) agus an t-siolandair (Z) a’ cleachdadh na foirmle a leanas: τ = Z . α.
Chaidh an clàr-amais donnachaidh a dhearbhadh a rèir modh Meidav et.al.29Chaidh sampall sùgh 10-ml a chuir ann an inneal-snìomh aig 2750 xg airson 10 mionaidean. Chaidh 5 ml den t-sùgh os cionn a’ mheasgachadh le 5 ml de ethanol 95%. Chaidh gabhail a-steach a’ mheasgachaidh a thomhas aig 420 nm a’ cleachdadh speactrofotomeatair UV Shimadzu (UV-1601 PC).
Chaidh susbaint iomlan phenolic (TPC) a dhearbhadh gu dathimeatrach a’ cleachdadh an reagent Folin-Ciocalteu mar a chaidh a mhìneachadh le Boulton et al.[27Chaidh lùb àbhaisteach de dh’aigéad gallic a thogail airson dùmhlachdan bho 0 gu 500 mg/L (r²= 0.997). Tha na toraidhean air an cur an cèill mar cho-ionannachdan searbhag gallic (mg GAE/mL).
Cuir 125 μL de dh’uisge grùide agus 2850 μL de fhuasgladh FRAP ri 25 μL de shùgh ubhal agus fàg am measgachadh anns an dorchadas airson30min. An uairsin tomhais an absorbance aig 593 nm a’ cleachdadh speactrophotometer UV Shimadzu (UV-1601 PC). Chaidh an reagent FRAP ullachadh le bhith a’ measgachadh bufair acetate 300 mM (pH 3.6), clòraid iarainn (III) 20 mM, agus 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (air a sgaoileadh ann an 40 mM HCl) ann an co-mheas de 10:1:1. Chaidh lùb àbhaisteach a chruthachadh a’ cleachdadh Trolox mar an ìre àbhaisteach (R²= 0.999), agus tha na toraidhean air an cur an cèill mar μM Trolox/mL.
Chaidh gnìomhachd antioxidant nan sùghan air an làimhseachadh agus gun làimhseachadh a dhearbhadh a’ cleachdadh dòigh DPPH gus measadh a dhèanamh air an comas radicals saor DPPH a sgrìobadh.31Chaidh deich microliotairean de shùgh a mheasgachadh le 1 ml de fhuasgladh DPPH (100 μM) ann am meatanól. Às dèidh freagairt anns an dorchadas airson 30 mionaid, chaidh gabhail a-steach a’ mheasgachaidh a thomhas aig 517 nm a’ cleachdadh speactrofotomeatair UV Shimadzu (UV-1601 PC). Chaidh na toraidhean a chur an cèill mar cho-ionannachdan trolox (μM trolox/ml) stèidhichte air lùb calabrachaidh (R2= 0.990).
Sheall an dàta a fhuaireadh gun deach an ìre as àirde de chinneasachadh laccase fhaicinn ann am balgan-buachair oisirean NRC 620 ro dheireadh an 18mh latha de choipeadh, a’ ruighinn gnìomhachd de 1302 U/L. Bha seo na bhunait airson an ùine àiteachaidh as fheàrr a dhearbhadh airson cinneasachadh laccase (Figear 1). Ged a mheudaich cinneasachadh enzyme le barrachd ùine àiteachaidh, cha robh an ìre àrdachaidh dìreach co-rèireach ris an ùine àiteachaidh; às dèidh 21 latha, cha robh gnìomhachd enzyme air a dhol suas ach 90 U/L (gu 1390 U/L). Mar sin, chaidh 18 latha a thaghadh mu dheireadh mar an ùine àiteachaidh as fheàrr gus cothromachadh a dhèanamh eadar toradh toraidh agus na buannachdan eaconamach bho bhith a’ leudachadh ùine àiteachaidh.
Buaidh ùine àiteachaidh air toradh laccase ann am Pleurotus ostreatus NRC 620. Chaidh trì blocaichean mycelial fungach (12 mm) a chur ann an 50 ml de mheadhan steirile agus an uairsin a chur ann an àiteach aig 28 °C airson diofar amannan.
A rèir sgrùdaidhean eile, tha na toraidhean againn a’ sealltainn gur e an ùine cultarach as fheàrr gus an ìre as àirde de laccase a thoirt a-mach le fungasan eadar 7 agus 36 latha.32A rèir Ezike et al.33, Chruthaich *Trametes polyzona* WRF03 an ìre as àirde de laccase ro dheireadh an naoidheamh latha de choipeadh, le gnìomhachd shònraichte de 1637 U/mg pròtain. A bharrachd air sin, Othman et al.34lorg iad gun robh *Trichoderma harzianum* S7113 a’ leigeil a-mach tòrr laccase air a’ chòigeamh latha de chultar. Ràinig ìre cinneasachaidh laccase gnìomhachd as àirde air a’ cheathramh latha deug agus an uairsin lùghdaich e mean air mhean.34Ged a dh’ fhaodadh leigeil ma sgaoil einnsein tachairt aig àm a’ phrìomh ìre fàis cuideachd, mar as trice bidh e aig a’ char as àirde aig àm an eadar-mheadhanaich agus bidh e air a bhrosnachadh le caitheamh stòr gualain no naitridean.34,35
Ged a sheall laccase bho Pleurotus ostreatus NRC 620 gnìomhachd àrd thairis air raon teòthachd farsaing bho 50°C gu 80°C, faisg air a’ ghnìomhachd as àirde (69–98%), chaidh a’ ghnìomhachd as àirde fhaicinn aig 70°C (Figear 2a). Taobh a-muigh an raoin teòthachd seo, lùghdaich gnìomhachd einnsein aig timcheall air 70°C. Tha na toraidhean seo a’ moladh gu bheil an einnsein gnìomhach aig teòthachdan àrda, is dòcha leis gu bheil teòthachd àrd ag àrdachadh lùth cineatach an ath-bhualadh.
Buaidh teòthachd ath-bhualaidh (a) agus pH (b) air gnìomhachd laccase ann an *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Chaidh teòthachdan eadar 20 agus 90 °C a choileanadh le bhith a’ ro-ghoir a’ mheasgachaidh aig diofar theodhachdan airson 5 mionaidean mus deach an enzyme a chur ris agus an ath-bhualadh a thòiseachadh. Chaidh buaidh pH air gnìomhachd laccase a mheasadh le bhith a’ cleachdadh ABTS mar fho-strat ann am fuasglaidhean anns an robh bufair citrate-phosphate 0.1 M thairis air raon pH eadar 2.5 agus 7.0.
A rèir Ezike et al.al.33, is e 55 °C an teòthachd as fheàrr airson *Trametes polyzona* WRF03 laccase, agus tha sin an aon rud ri *Ganoderma lucidum*laccase36agus coltach ris an teòthachd as fheàrr (50 °C) airson *Trametes polyzona* KU-RNW02737lacàis . Baldrian38a’ toirt fa-near, mar a tha ann an siostaman einsíme eile a bhios a’ briseadh sìos lignin, gur e an raon teòthachd air leth freagarrach airson laccase eadar 50 agus 70 °C.
Sheall na toraidhean gun robh an gnìomhachd as àirde aig an einnsein aig pH 3.0, a’ ruighinn 94% de ghnìomhachd aig pH 3.5. Ach, dh’fhan e gnìomhach thairis air raon pH farsaing bho 2.5 gu 7.0 (Figear 2b). A bharrachd air an sin, sheall e gnìomhachd nas àirde ann an suidheachaidhean searbhagach an taca ri suidheachaidhean neodrach no alcalin. Dh’fhan a ghnìomhachd co-dhiù 77% thairis air an raon pH bho 2.5 gu 4.5, ach cha do ràinig e ach timcheall air 38% aig pH 7.0. B’ e 4.533 an pH as fheàrr airson laccase bho *Trametes polyzona* WRF03, agus tha sin an aon rud ris a’ pH airson laccases bho *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, agus *Trametes hirsuta* 41. Ach, a rèir an sgrùdaidh le Chairin et al.42, is e 2.2 an pH as fheàrr airson laccase bho *Polymorpha f. sp.* WR710-1, agus is e 5.043 an pH as fheàrr airson laccase bho *Polymorpha f. sp.* IBL-04. Dh’fhaodadh ceangal anionan haidreocsaid (bacadh laccase) ri ataman copair laccase T2/T3 a bhith na adhbhar airson an gnìomhachd laccase lùghdaichte fo chumhachan pH neodrach no alcalin. Dh’fhaodadh seo bacadh a chur air gluasad dealanach a-staigh bhon ionad T1 chun ionad T2/T3, agus mar sincuingealaichtegnìomhachd an einnsein23,44
Le bhith a’ goradh an einnsein aig diofar theodhachdan, chaidh a lorg gun robh buaidh aig an dà chuid ùine goraidh agus teòthachd air seasmhachd an einnsein. Gu sònraichte, sheall laccase bho *Trametes polyzona* NRC 620 seasmhachd nas àirde aig 40℃ agus 50℃, a’ gleidheadh 68.33% agus 59.61% den ghnìomhachd thùsail aige, fa leth, an dèidh 120 mionaid (Figear 3a). An coimeas ri sin, fo na h-aon chumhachan (40℃ agus 50℃, 120 mionaid), ghlèidh laccase bho *Trametes polyzona* WRF03 64.38% agus 42.92% den ghnìomhachd aige, fa leth.33Air an làimh eile, lùghdaich àrdachadh ann an ùine goir agus teòthachd seasmhachd laccase *Trametes polyzona* NRC 620; Às dèidh goir aig 60℃ agus 70℃ airson 60 mionaid, lùghdaich a ghnìomhachd gu 39.24% agus 1.72%, fa leth (Figear 3a). A rèir nan toraidhean deuchainneach, sheall laccase bho *Trametes polyzona* WRF03 seasmhachd nas àirde aig 40 agus 50℃ tron phròiseas làimhseachaidh teirmeach.33San aon dòigh, Lueangjaroenkit et al.al.37agus Cathraiche etal.42thug iad cunntas air seasmhachd laccases bho Trametes polyzona KURNW027 agus Trametes polyzona WR710-1 aig 50 °C airson 1 uair a thìde, fa leth. Mar bhiocatalastair feumail a ghabhas a chur an sàs ann an grunn raointean bith-theicneòlais, bu chòir gum biodh deagh sheasmhachd agus coileanadh aig laccase thairis air raon teòthachd farsaing.
Seasmhachd teirmeastatach (a) agus seasmhachd pH (b) laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Chaidh seasmhachd teirmeastatach a mheasadh le bhith a’ goradh fuasgladh an einnsein ann am bufair sodium phosphate 0.05 M (pH 7.0) aig 40, 50, 60, agus 70 °C airson 2 uair a thìde, fa leth. Chaidh seasmhachd pH a mheasadh le bhith a’ goradh fuasgladh an einnsein ann am bufair citrate 0.1 M agus bufair Tris (pH 3, 4, 6, agus 7) aig 40 °C airson 2 uair a thìde. Chaidh gnìomhachd fuigheallach obrachadh a-mach a’ cleachdadh ABTS mar shubstrait às dèidh goradh.
Gus na suidheachaidhean as fheàrr airson cleachdadh agus stòradh einnsein a dhearbhadh, rinn sinn sgrùdadh air buaidh pH air seasmhachd laccase. Thug nochdadh do dhiofar luachan pH buaidh mhòr air seasmhachd structar a’ phròtain, agus mar sin a’ toirt buaidh air seasmhachd agus gnìomhachd moileciuil an einnsein. Sheall na toraidhean gu robh an einnsein nas lugha seasmhach fo chumhachan searbhagach, agus sheall e seasmhachd nas fheàrr aig luachan pH nas àirde (roinnean neodrach agus alcalin). Aig luachan pH de 7.0, 6.0, 4.0, agus 3.0, bha ìrean gleidhidh einnsein às deidh 120 mionaid timcheall air 100%, 62.54%, 52.39%, agus 11.14%, fa leth (Figear 3b). Sheall laccase *Strombus multisus* WRF03 seasmhachd nas àirde aig luachan pH neodrach (5.5–6.5) agus seasmhachd nas ìsle aig luachan pH searbhagach (fo 4.0). Às dèidh 120 mionaid aig luachan pH de 5.5, 6.0, agus 6.5, bha ìrean gleidhidh nan einnsein timcheall air 82%, 100%, agus 93%, fa leth.33Khairin et al.42thug iad fa-near gu robh laccase bho Trametes polyzona WR710-1 seasmhach anns an raon pH de 6.0 gu 7.0, agus Sayed et al.45sheall e gu robh laccase nas seasmhaiche fo chumhachan pH neodrach. Ach, sheall laccase bho Cerrena unicolor seasmhachd cuideachd fo chumhachan alcaileach (pH 9.0)46Sheall na laccases a chaidh a sgrùdadh seasmhachd àrd thairis air raon pH farsaing. Dh’fhaodadh seo a bhith na fheart cudromach airson cleachdaidhean gnìomhachais.
Leis gu bheil buaidhean brosnachail is bacaidh aig cuid de na h-ianan meatailt air gnìomhachd einnsein, feumar beachdachadh air na buaidhean aca air gnìomhachd einnsein ann an tagraidhean gnìomhachais. Tha seo deatamach leis gu bheil ianan meatailt nan truailleadh àrainneachdail cumanta a dh’ fhaodadh buaidh a thoirt air seasmhachd agus co-chur einnsein taobh a-muigh na cealla.47Gus buaidh iomadh ian meatailt air laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620 a sgrùdadh, rinn sinn deuchainnean co-fhreagarrach. Mar a chithear ann am Figear 4, a rèir an seòrsa meatailt a chaidh a chleachdadh, bha buaidh àicheil aig àrdachadh dùmhlachd nan ian meatailt bho 2.5 mM gu 10 mM air gnìomhachd an einnsein. Mar eisimpleir,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺, agusCu²⁺dh’ fhaodadh e gnìomhachd an einnsein a bhrosnachadh agus a ghnìomhachadh, fhad ‘s aNa⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺, agusK⁺dh’ fhaodadh sin gnìomhachd an einnsein a bhacadh. Aig dùmhlachd de 10 mM, b’ e ianan Cu²⁺ agus Mg²⁺ na gnìomhaichean as cumhachdaiche de ghnìomhachd laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620, a’ toirt seachad ìre gnìomhachaidh de mu 34% agus 20%, fa leth. Ach, aig dùmhlachd de 10 mM, b’ e ianan Ca²⁺ an casg as cumhachdaiche de laccase, a’ lughdachadh gnìomhachd einnsein mu 60%.
Buaidh ianan meatailt air gnìomhachd laccase Pleurotus ostreatus NRC 620. Chaidh an laccase a ghoir airson 10 mionaidean ann am bufair fosfáit sodium (0.05 M, pH 7.0) anns an robh diofar ianan meatailt aig dùmhlachdan de 2.5 mM agus 10 mM. Chaidh an ath-bhualadh an uairsin a thòiseachadh le bhith a’ cur an t-substrate (ABTS) ris, agus às dèidh sin chaidh an gnìomhachd coimeasach a thomhas.
Tha na toraidhean againne co-chòrdail ri toraidhean ùghdaran eile a lorg gu bheil Mg²⁺ agus Cu²⁺ a’ neartachadh gnìomhachd *Trametes polyzona* WRF03³. Lorg Castaño et al.⁴⁸ gu bheil laccase bho *Xylaria* sp. air a bhrosnachadh gu ìre le ianan copair (Cu²⁺). A bharrachd air an sin, rinn Foroutanfar et al.⁴⁹ agus Si et al.⁵⁰ sgrùdaidhean coltach ris air laccases bho *Paraconiothyrium variabile* agus *Trametes pubescens*, fa leth. Faodar làrach ceangail copair seòrsa II (T2) an einnsein seo a shàthachadh le Cu²⁺ aig dùmhlachd sònraichte, agus dh’ fhaodadh seo mìneachadh carson a tha gnìomhachd laccase air a bhrosnachadh aig dùmhlachdan Cu²⁺³⁹ nas àirde. Leis gu bheil laccases fungas grod geal nan oxidase anns a bheil iomadh dadam copair, tha buaidhean ianan copair air gnìomhachd laccase eadar-mheasgte agus a’ dol bho bhrosnachail agus bacaidh gu neodrach.⁵¹ An coimeas ri sin, Zhou et al.[52]dh’innis e gunCu²⁺chuir e bacadh air gnìomhachd laccase teirmeit fon talamh Taiwan (Odontotermes formosanus). Ach, laccases de Cerena sp. HYB07[53]agus Clitocybe maxima[54]cha robh buaidh aig ianan copair orra.
Bha sònrachas an t-substrate air a riochdachadh leis na paramadairean cineatach aige (Km agus Vmax); mar as làidire an dàimh ceangail a th’ aig an t-substrate ris an enzyme, ’s ann as ìsle luach Km agus ’s ann as àirde sònrachas an t-substrate.3,21,55Chaidh paramadairean cineatach (Km agus Vmax) laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620 a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh bathar-bog GraphPad Prism 6.0 le bhith a’ plotadh plota Lineweaver-Burk (Figear 5). Nuair a chaidh ABTS a chleachdadh mar fho-strat, b’ e na toraidhean 1.99 mM agus 16217 μmol.mion⁻¹ L⁻¹,fa leth. Elsayed et al.21aithris gun robh na luachan Km airson ocsaidachadh ABTS 0.1 mM agus 0.064 mM, fa leth, a’ nochdadh dlùth-cheangal àrd eadar isoenzymes Lac A agus Lac B airson ABTS. A bharrachd air sin, b’ e 0.182 μmol na luachan Vmaxmion⁻¹agus 0.603 μmolmion⁻¹, fa leth. Bha an luach Km a fhuaireadh nas ìsle na luach Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); a bharrachd air sin, bha an luach Vmax aca (1429 mmol min⁻¹) cuideachdnas ìslenuair a thathar a’ cleachdadh ABTS mar fho-strat.33 San aon dòigh, b’ e 0.0714 mM agus 0.025 mM, fa leth, luachan Km de dùmhlachdan laccase Lentinus squarrosulus MR13 agus Trametes sp. AH28-2, agus b’ e 0.0091 mM min−1 agus 0.67 mM min−1 mg−1 na luachan Vmax (an coimeas ri ABTS), fa leth.56,57
Chaidh buaidh dùmhlachd ABTS air gnìomhachd laccase bho *Pleurotus ostreatus* NRC 620 a sgrùdadh, agus chaidh plota Lineweaver-Burk de cho-phàirteach astar an ath-bhualaidh tùsail an aghaidh dùmhlachd ABTS a phlòtadh. Chaidh ath-bhualadh ocsaididh ABTS le diofar cho-chruinneachaidhean (0.025–3.0 mM) de laccase a thomhas aig pH 4.5 gus na paramadairean cineatach (Vmax agus Km) a dhearbhadh. Chaidh na cunbhalachdan cineatach Michaelis-Menten obrachadh a-mach a’ cleachdadh plota Lineweaver-Burk de cho-phàirteach astar an ath-bhualaidh an aghaidh dùmhlachd an t-substrate. Chaidh na cunbhalachdan cineatach obrachadh a-mach bhon phlota Lineweaver-Burk a’ cleachdadh bathar-bog GraphPad Prism 6.01.
Bidh einnseanan soilleireachaidh traidiseanta, leithid pectinases, a’ hydrolysis stuthan peicteach, a’ lughdachadh slaodachd agus ceòthachd. Bidh iad a’ briseadh sìos polysaccharides structarail gu h-èifeachdach agus gu tric bidh iad air an cleachdadh ann an co-bhonn ri einnseanan eile, leithid cellulases agus hemicellulases, gus toradh agus soilleireachd a leasachadh. Ach, chan eil pectinases ag amas gu sònraichte air todhar phenolic, a tha nam prìomh adhbharan airson ceòthachd agus donnachadh oxidative, gu sònraichte ann an sùghan leithid sùgh ubhal agus sùgh fìon-dhearcan.58An coimeas ri sin, bidh laccases a’ catalachadh oxidation choimeasgaidhean phenolic, gan poilimearachadh gu bhith nan moileciuilean nas motha, do-sgaoilte a ghabhas toirt air falbh le bhith gan cur sìos no gan sìoladh. Chan e a-mhàin gu bheil an dòigh-obrach seo a’ leasachadh soilleireachd ach cuideachd a’ leudachadh beatha sgeilp sùgh le bhith a’ lughdachadh coltachd donnachadh oxidative air adhbhrachadh le coimeasgaidhean phenolic. A bharrachd air an sin, faodar pròiseasan soilleireachaidh stèidhichte air laccase a dhèanamh fo chumhachan giullachd tlàth (pH 3.5–5.5, teòthachd 25–40 °C), gan dèanamh freagarrach airson sùghan mìne gun a bhith a’ dèanamh cron air na feartan beathachaidh no organoleptic aca.59Tha sgrùdaidhean air sealltainn gum faod làimhseachadh le pectinase sùgh a shoilleireachadh ann an 1–2 uair a thìde, agus mar as trice bidh feum aig làimhseachadh le laccase air ùine freagairt nas fhaide (3–6 uairean a thìde) gus todhar phenolic a lughdachadh gu tur. Ach, faodar am pròiseas seo a bharrachadh le bhith a’ cur an einnsein gun ghluasad no le bhith a’ cothlamadh laccase le dòighean soilleireachaidh meacanaigeach.60Anns an sgrùdadh seo, nochd pròifileadh einnsein den earrann amh gnìomhachd laccase agus α-amylase cudromach, agus bha gnìomhachd pectinase agus xylanase gu math ìosal, agus cha deach gnìomhachd cellulase a lorg. Mar sin, b’ e gnìomh laccase sa mhòr-chuid a bha a’ lùghdachadh ann an ceòthachd agus susbaint phenolic, agus dh’ fhaodadh an t-atharrachadh ann an slaodachd a bhith mar thoradh air gnìomh amylase gu ìre.
Tha Clàr 1 a’ sealltainn nam paramadairean fiosaigeach-cheimigeach ann an sampallan sùgh ubhal ùr-bhrùite agus sampallan air an làimhseachadh le laccase. Sheall na toraidhean gu robh toradh sùgh ubhal ùr-bhrùite (71.59%) nas ìsle na toradh sampallan air an làimhseachadh le laccase (87.34%). Tha na toraidhean seo a’ co-chòrdadh ri co-dhùnaidhean Pilnik agus Orange.61, a chomharraich gum faod cleachdadh einsìmean ann am pròiseasadh mheasan toradh sùgh a mheudachadh, sìoladh a leasachadh, agus sùgh soilleir, àrd-inbhe fhaighinn airson dùmhlachd. Tha an àrdachadh ann an toradh sùgh gu ìre mhòr mar thoradh air an àrdachadh ann an susbaint shiùcairean so-sgaoilte anns an sùgh. Rè hydrolysis einsìmeach mheasan, bidh mesoglea agus pectin ann am ballachan cealla an toraidh air an sgrios agus air an tionndadh gu stuthan so-sgaoilte leithid shiùcairean neodrach agus aigéid.62.Bha luach pH sùgh ubhal air an robh enzyme gu math nas ìsle na luach pH a’ bhuidhinn smachd (P < 0.05), agus dh’èirich luach pH an dà bhuidhinn gu mòr rè an stòraidh (Clàr 1). Tha na toraidhean seo a’ co-chòrdadh ri toraidhean Mark et al.63, a thug fa-near gun do lùghdaich pH sùgh mheasan cnò-bhainne às dèidh stòraidh às dèidh làimhseachadh teas. Dh’fhaodadh crìonadh pectin agus cruthachadh searbhag galacturonic às dèidh làimhseachadh einnsein a bhith cunntachail airson an àrdachadh ann am pH rè stòraidh. Dh’fhan pH nan sampallan air an làimhseachadh le einnsein eadar 4.05 agus 4.31 tron stòradh, agus bha pH sùgh ubhal gun làimhseachadh eadar 4.12 agus 4.33.
Sheall searbhachd iomlan (TA) an dà chuid sampallan gun làimhseachadh agus sampallan air an làimhseachadh le laccase gluasad a’ lùghdachadh le ùine stòraidh a’ sìor fhàs (Clàr 1). Chaidh an lùghdachadh ann an searbhachd a chur às leth tionndadh aigéid organach gu gualaisg no ath-bheachdan einsímeach, a bharrachd air ocsaidachadh rè stòradh sùgh.64Bha searbhachd iomlan an sùgh ubhal smachd agus nan sampallan air an làimhseachadh le enzyman nas ìsle na searbhachd sùghan eile (sùgh connlaich 0.9%, sùgh pluma 2.2%, sùgh kumquat 1.0%, sùgh apricot 2.4%, sùgh orainds 0.8%), ach coltach ri searbhachd sùghan eile (me, sùgh piorra 0.3%).62Dh’fhaodadh na h-eadar-dhealachaidhean seo ann an sùgh ubhal ùr-bhrùite gun làimhseachadh a bhith mar thoradh air grunn nithean leithid suidheachaidhean fàis, factaran ginteil, ìre aibidh, agus dòighean giullachd.65Tha an lùghdachadh ann an searbhachd iomlan sùgh ubhal smachd agus sùgh ubhal air a làimhseachadh le laccase a rèir nan toraidhean a chuir Singh et al.66a thaobh lùghdachadh ann an searbhachd iomlan sùgh ubhal Jin Nuo an dèidh 74 latha de stòradh. Air an làimh eile, Oshmiansky agus Wojdylo67cha d’ fhuair iad atharrachaidhean mòra sam bith ann an searbhachd sùgh ubhal nuair a bha iad a’ sgrùdadh buaidh dhòighean soilleireachaidh traidiseanta.
Tha na toraidhean a tha air an taisbeanadh ann an Clàr 1 a’ sealltainn gu robh luach nan solidan soluble iomlan (TSS) anns an sùgh ubhal air a làimhseachadh le laccase nas àirde na bha e anns an t-sampall gun làimhseachadh. Tha na toraidhean seo a’ co-chòrdadh ris na sgrùdaidhean a chaidh fhoillseachadh.. 68A bharrachd air sin, tha Clàr 1 a’ sealltainn gun robh luach TSS a’ bhuidhinn sùgh ubhal smachd aig 9.58 aig a’ chiad àm agus gun do ràinig e 11.05 ro dheireadh na h-ùine stòraidh. Tha na luachan seo nas ìsle na luachan TSS sùgh ubhal ùr a chaidh aithris le Hamid et al.. 69(11.2 agus 11.80, fa leth). Mheudaich luach TSS nan sampallan sùgh ubhal air an làimhseachadh le laccase gu mòr, a’ tòiseachadh bho 11.23 agus a’ ruighinn 12.93 an dèidh dà sheachdain de stòradh aig 4°C (Clàr 1). Chaidh àrdachadh coltach ri seo ann an TSS rè stòradh fhaicinn ann am measan citris, lemonan, agus oraindsearan milis. Is dòcha gu bheil an àrdachadh ann an solidan soluble iomlan (TSS) rè stòradh mar thoradh air hydrolysis polysaccharides (stalc) gu monosaccharides (siùcaran), an àrdachadh ann an dùmhlachd mar thoradh air dìth uisgeachadh sùgh, agus lobhadh pectin anns an t-sùgh gu solidan soluble. Tha an àrdachadh ann an solidan soluble iomlan (TSS) dualtach mar thoradh air an àrdachadh ann an siùcaran soluble, a dh’ fhaodadh a bhith air a chruthachadh le bhith ag atharrachadh pectin no ceallalòs gu siùcaran soluble le pectin no cellulase, fa leth, no le hydrolysis stalc gu siùcaran, mar a chaidh aithris le Hamed et al.69.Chithear buaidh laccase air feartan sùgh ubhal gu fradharcach, leis gu bheil sùgh ubhal air a làimhseachadh le laccase a’ nochdadh sruthadh nas fheàrr agus slaodachd nas ìsle na sùgh gun làimhseachadh. Tha an aire seo air a chlàradh ann an Clàr 1; B’ e 1.87 cP slaodachd an t-sampall air a làimhseachadh le enzyme, agus b’ e 2.95 cP slaodachd an t-sampall smachd. Tha e coltach gu bheil an lùghdachadh mòr seo ann an slaodachd mar thoradh air comas gleidhidh uisge nas àirde stuthan coltach ri pectin agus cruthachadh structar lìonra co-leanailteach.
Anns an sgrùdadh seo, chaidh buaidh laccase air clàr-amais donnachaidh (BI) sùgh ubhal a sgrùdadh le bhith a’ tomhas an absorbance aig 420 nm a’ cleachdadh speactrofotomeatair. Tha na toraidhean air an sealltainn ann an Clàr 1. Rè stòradh, sheall BI sampallan sùgh ubhal anns na buidhnean air an làimhseachadh agus gun làimhseachadh gluasad mean air mhean a’ sìor dhol am meud. Tha BI a’ nochdadh ìre an donnachaidh agus faodaidh e a bhith na…cudromachcomharradh air ath-bhualaidhean donnachaidh einnseamach agus neo-einseamach. Mheudaich an gabhail a-steach gu mòr rè stòradh (P < 0.05). Aig deireadh an stòraidh, anA420Mheudaich luach shamhlaichean sùgh ubhal anns na buidhnean smachd agus an fheadhainn a fhuair làimhseachadh le enzym mu 217% agus 121%, fa leth (Clàr 1). Tha na toraidhean a’ nochdadh gun urrainn làimhseachadh le enzym an ìre donnachaidh a lùghdachadh gu h-èifeachdach mu 56%. Tha toraidhean Bezerra et al.[19] a tha a rèir ar toraidhean; Chleachd iad snàithleach laccase-glutaraldehyde-cnò-chnò gus sùgh ubhal a shoilleireachadh, a’ lughdachadh a dhath tùsail le 61%.
Ged a tha buaidhean beathachaidh is leigheasach adhartach aig poileafenolan ann an sùgh mheasan air a’ bhodhaig, faodaidh iad cuideachd freagairt le pròtainean, ag adhbhrachadh sgòthachd, grùdadh no ceòthachd an sùgh, agus mar sin ag atharrachadh blas is fàileadh an toraidh agus a’ lughdachadh a bheatha sgeilp.71B’ e amas an sgrùdaidh seo susbaint todhar phenolic sùgh ubhal a lùghdachadh gu sàbhailte le bhith a’ cleachdadh laccase bho Pleurotus ostreatus NRC 620. Tha na toraidhean a tha air an taisbeanadh ann an Clàr 1 a’ sealltainn gun deach susbaint iomlan todhar phenolic sùgh ubhal air a làimhseachadh le laccase a lùghdachadh gu mòr mus deach a stòradh aig 4 °C. A bharrachd air an sin, lùghdaich susbaint iomlan todhar phenolic cuideachd rè stòradh anns an dà shampall a chaidh a sgrùdadh (Clàr 1). Rannsachadh le Sandri et al.72sheall e gum faod sùgh ubhal air a làimhseachadh le enzyman a ghnìomhachd antioxidant agus susbaint todhar phenolic a chumail. Ach, tha toraidhean sgrùdadh le Lettera et al.73sealltainn gum faod làimhseachadh sùgh orainds le laccase fungach susbaint nan todhar phenolic ann a lùghdachadh suas ri 45%.
Chaidh sealltainn gu bheil feartan aig todhar feinòlach leithid sgrìobadh radicals saor, lughdachadh agus cuir às do ogsaidean singilte, gluasad atam haidridean, agus tabhartas dealanach do radicals saor, gan dèanamh nan antioxidants cumhachdach.74Mar sin, san sgrùdadh seo, chaidh dòighean stèidhichte air DPPH agus FRAP a chleachdadh gus measadh a dhèanamh air buaidh laccase air gnìomhachd antioxidant sùgh ubhal a chaidh a stòradh ann am frids airson 14 latha (Clàr 2). Sheall an dà dhòigh àrdachadh ann an gnìomhachd antioxidant rè stòradh, agus is dòcha gur e seo an adhbhar airson àrdachadh ann an todhar phenolic an-asgaidh no cruthachadh thoraidhean ath-bhualadh Maillard (MRPn), agus is dòcha gur e toraidhean ath-bhualadh Maillard as coireach ris an àrdachadh ann an gnìomhachd antioxidant.75Bidh ath-bheachdan donnachaidh neo-einsimigeach (a’ gabhail a-steach lobhadh searbhag ascorbic, ath-bheachdan Maillard, agus lobhadh shiùcairean air a chatalachadh le searbhag) a’ toirt a-mach pigmentan donn (melanoidins). Faodaidh toraidhean lobhadh searbhag ascorbic eadar-mheadhanach agus toraidhean lobhadh siùcair (leithid todhar carbonyl) ath-bhualadh le amino-aigéid tro ath-bheachdan Maillard.76Ged a chaidh sgrùdadh farsaing a dhèanamh air donnachadh mheasan is ghlasraich rè stòradh, tha ar tuigse air na h-ath-bhualaidhean sin fhathast cuingealaichte.77An coimeas ris an dòigh FRAP, sheall sùgh ubhal air a làimhseachadh le laccase gnìomhachd antioxidant gu math nas ìsle leis an dòigh DPPH (Clàr 2), agus mheudaich gnìomhachd antioxidant nan sampallan uile gu mòr le àrdachadh ann an ùine stòraidh. Chaidh dà dhòigh eadar-dhealaichte airson gnìomhachd antioxidant a dhearbhadh a chleachdadh san sgrùdadh seo leis gu bheil na prionnsapalan aca eadar-dhealaichte. Bidh an dòigh DPPH a’ tomhas a’ chomas radicals saor a neodachadh, agus bidh an dòigh FRAP a’ tomhas a’ chomas ianan iarainn a lughdachadh. Mar sin, thathas a’ moladh grunn dhòighean a chleachdadh airson gnìomhachd antioxidant a dhearbhadh gus tuigse nas fheàrr fhaighinn air gnìomhachd antioxidant nan sampallan a chaidh a sgrùdadh.78
Is e aon de na prìomh thoraidhean bhon sgrùdadh seo gu bheil laccase *Pleurotus ostreatus* NRC 620 a’ nochdadh gnìomhachd as fheàrr aig 70°C agus pH 3.0. An coimeas ri laccases fungach eile a thathas a’ cleachdadh gu cumanta airson soilleireachadh sùgh, leithid laccases *Trametes versicolor* agus *Ganoderma lucidum*, tha *P. ostreatus* NRC 620 a’ nochdadh seasmhachd teirmeach nas àirde agus pH nas searbhagach. Mar as trice bidh laccases bho *Trametes versicolor* agus *Ganoderma lucidum* a’ nochdadh gnìomhachd as fheàrr anns an raon 50-60°C agus aig luachan pH eadar 3.5 agus 5.0. Dh’ fhaodadh an diofar seo cur ri èifeachdas soilleireachaidh sùgh nas fheàrr, gu sònraichte airson sùghan searbhagach far a bheil seasmhachd aig luachan pH nas ìsle deatamach. Is e feart sònraichte *P. An coimeas ri laccases fungach eile a chaidh a sgrùdadh, tha *Pleurotus ostreatus* NRC 620 a’ nochdadh a’ chomas obrachadh gu h-èifeachdach fo chumhachan nas dùbhlanaiche. Tha an teòthachd gnìomhachd as fheàrr aige a’ moladh buannachdan a dh’ fhaodadh a bhith ann an tagraidhean gnìomhachais, leithid ìrean freagairt nas luaithe agus lùghdachadh air truailleadh meanbh-bhitheach. Dh’ fhaodadh a pH ìosal, a tha freagarrach do nàdar searbhagach mòran shùgh, a bhith feumail ann am pròiseasan soilleireachaidh sùgh. Tha na toraidhean seo a’ fìreanachadh tuilleadh rannsachaidh airson tagradh mòr-sgèile, a’ dèanamh *Pleurotus ostreatus* NRC 620 na roghainn eile a tha comasach an àite stòran laccase fungach traidiseanta. An coimeas ri sgrùdaidhean roimhe, fhuair sinn a-mach gur e 60°C an teòthachd as fheàrr agus gur e 3.0 am pH as fheàrr. Às deidh freagairt aig 60°C airson 80 mionaid, ghlèidh laccase *Ganoderma lucidum*46% den ghnìomhachd aige.79 A rèir Kurniawati agus Nicelle80, Tha seasmhachd sàr-mhath gu meadhanach aig einsìmean *Ganoderma lucidum* aig 25°C agus luachan pH eadar 5.0 agus 8.0, agus seasmhachd aig pH 6.0 agus teòthachd eadar 10 agus 30°C. Anns an sgrùdadh seo, fhuair sinn a-mach gur e 3.0 agus 70°C an ìre pH agus an teòthachd as fheàrr airson gnìomhachd einsìme airson *Pleurotus ostreatus*, fa leth. Às dèidh goinneadaireachd aig 40°C agus 50°C airson dà uair a thìde, ghlèidh an einsìm 68.33% agus 59.61% den ghnìomhachd aige, fa leth. A bharrachd air an sin, sheall laccase Pleurotus ostreatus NRC 620 gnìomhachd àrd thairis air raon teòthachd farsaing bho 50°C gu 80°C, cha mhòr a’ ruighinn a’ ghnìomhachd as àirde (69%–98%), leis a’ ghnìomhachd as àirde air fhaicinn aig 70°C.
Mar cho-dhùnadh, sheall laccase balgan-buachair eisirean NRC620, a fhuaireadh fo chumhachan statach, gnìomhachd agus seasmhachd as fheàrr thar raon de shuidheachaidhean pH agus teòthachd, a’ sealltainn seasmhachd nas fheàrr an taca ri stòran einnsein eile. Mheudaich cur-ris 10 mM MgSO₄ agus CuSO₄ gnìomhachd einnsein mu 21% agus 35%, fa leth. Nuair a chaidh a phròiseasadh gu sùgh ubhal, lughdaich an einnsein pH agus slaodachd, agus cha do lughdaich an susbaint phenolic ach beagan rè stòradh.
Tha na toraidhean a’ dearbhadh comas laccase ann an gnìomhachas a’ bhidhe, gu h-àraidh ann an soilleireachadh dheochan. Le bhith a’ briseadh sìos todhar feinileach gu sònraichte, chan e a-mhàin gu bheil laccase a’ lughdachadh ceòthachd agus a’ leasachadh soilleireachd ach cuideachd a’ cumail suas càileachd sùgh mheasan fo chumhachan obrachaidh tlàth. Eu-coltach ri riochdairean soilleireachaidh traidiseanta leithid gelatin, bentonite, agus silica gel, chan eil laccase a’ gineadh sgudal no a’ toirt air falbh fàilidhean tlachdmhor bho dheochan, ga dhèanamh na roghainn nas càirdeile don àrainneachd agus nas seasmhaiche. A bharrachd air an sin, an taca ri enzyman agus dòighean sìolaidh eile, tha laccase a’ tabhann fuasgladh cuimsichte agus cosg-èifeachdach gun a bhith a’ dèanamh cron air càileachd toraidh.
Kyomuhimbo, HD agus Brink, HG. Cleachdaidhean agus ro-innleachdan neo-ghluasadachd laccases anns a bheil copar; lèirmheas. Heliyon 9, e13156 (2023).
Àm puist: 15 Dùbhlachd 2025